Producción heteróloga y caracterización de una Lacasa microbiana

Abstract

El presente estudio se centró en la producción, purificación y caracterización de una lacasa recombinante de Bacillus coagulans expresada en Escherichia coli C41. Se evaluaron distintas fuentes y concentraciones de cobre, así como diferentes concentraciones de IPTG, identificándose que la combinación de 1 mM de IPTG y 0,25 mM de CuCl2 bajo agitación generó las mayores actividades enzimáticas en las condiciones ensayadas. La proteína recombinante fue purificada mediante cromatografía de afinidad con etiqueta de histidina utilizando el sistema ÄKTA pure, obteniéndose una proteína de aproximadamente 65 kDa con alta pureza. La caracterización enzimática reveló, utilizando 2,6-DMP como sustrato, un perfil bimodal de actividad en función del pH, con máximos a pH 7 en buffer citrato/fosfato y a pH 9 en buffer fosfato de sodio. La temperatura óptima fue de 40 °C en ambos casos, con una actividad significativamente mayor que la observada a 20 °C y 30 °C. Por otro lado, el pH 5 mostró la menor actividad entre todas las condiciones evaluadas. Estos resultados destacan el potencial de esta lacasa recombinante para aplicaciones biotecnológicas, especialmente en la degradación de contaminantes fenólicos persistentes en ambientes acuáticos.