Expresión heteróloga de la enzima GAPDH de Trypanosoma cruzi en Escherichia coli

Abstract

La enfermedad de Chagas, causada por el parásito Trypanosoma cruzi, requiere con urgencia nuevas vías terapéuticas debido a la toxicidad asociada a los tratamientos actuales. La glicerol-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH), que desempeña un papel esencial en el metabolismo energético del parásito, constituye una diana molecular prometedora. En este estudio nos hemos centrado en la expresión heteróloga de TcGAPDH en Escherichia coli Rosetta 2 (DE3) utilizando el vector pET-15b. Los resultados obtenidos confirmaron que el plásmido contiene el gen TcGAPDH y que, a partir de él, se expresa de manera eficiente una proteína de 45 kDa, lo cual se corroboró mediante SDS-PAGE. Esta proteína se purificó con éxito mediante cromatografía de afinidad (IMAC) y, en el ensayo cinético, se observó la reducción de NAD+ a NADH. Esto permitió comprobar la actividad biológica de la enzima mediante la observación de un punto de saturación a 1.2 mM de sustrato DL-G3P. Este sistema de producción fiable constituye una base sólida para el desarrollo futuro de inhibidores selectivos contra este tipo de parásito.